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探索用傅里葉變換紅外光譜法測定當(dāng)歸果膠多糖酯化度
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天津市能譜科技有限公司

時(shí)間: 2020-08-07 瀏覽量: 424

測定果膠DE公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法為化學(xué)滴定法,但此法樣品用量大、操作過程復(fù)雜且費(fèi)時(shí),近年來,紅外光譜作為一種快速光譜分析技術(shù)已越來越多地應(yīng)用于多糖的鑒定與組成分析。其主要優(yōu)點(diǎn)在于簡便、快速、低消耗以及樣品需求量少、不破壞樣品等。

國內(nèi)外學(xué)者已將傅立葉變換紅外光譜儀FTIR作為研究多糖化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)的一種有效工具。目前國內(nèi)尚無使用紅外光譜法測定果膠DE的報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用傅立葉變換紅外光譜儀對果膠多糖的酯化度(DE)進(jìn)行快速定量分析,并與傳統(tǒng)的化學(xué)滴定法進(jìn)行比較,研究其可行性。

實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器

主要試劑:不同酯化度果膠標(biāo)準(zhǔn)品,Sigma公司;KBr(光譜純),上海試劑一廠。

主要儀器:傅立葉變換紅外光譜儀。

實(shí)驗(yàn)材料:當(dāng)歸,購自無錫山禾藥業(yè)有限公司,經(jīng)鑒定為二級岷歸。

實(shí)驗(yàn)方法

1、當(dāng)歸多糖的制備

提?。寒?dāng)歸粉碎后,經(jīng)水提、醇沉、透析、冷凍干燥得粗多糖W-ASP。水提剩下的沉淀采用50mmol·L1Na0H、0.5%的EDTA溶液室溫提取,得粗多糖E-ASP。

純化:W-ASP經(jīng)DEAE—SepharoseCL-6B柱層析梯度洗脫,分別收集單一峰組分,透析,冷凍干燥得到3個(gè)純化組分、W_ASPl,W-ASP2和W-ASP3。

2、紅外光譜(FTIR)分析

將果膠標(biāo)樣和當(dāng)歸多糖測試樣品干燥,真空條件下研磨成粉狀。分別取果膠標(biāo)樣(DE64%)和測試樣品微量,KBr研磨壓片,采用Nicolet NexusFTIR于4000~400cm_1圍內(nèi)掃描。掃描32次,分辨率為4cm-1。

3、佩法測定樣品酯化度(DE)

標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備:將三種已知DE分別為26%,59%,94%的果膠標(biāo)樣按比例配制成DE為42.5%和76.5%的果膠標(biāo)樣。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:分別取DE為26%,42.5%,59%,76.5%,94%的果膠標(biāo)樣采用FTS7000系列FTIR在4000~400cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。采用單次衰減全反射分析(ATR),DTGS檢測器(D1G]LAB,Randolph,MA)。掃描128次,分辨率為4cm-1,每個(gè)樣品測3次,相應(yīng)數(shù)值取平均值。以DE(%)為縱坐標(biāo),A1730/(A1730+A1630)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立線性回歸方程。測試樣品W-ASP,EASP,W-ASP2及W-ASP3的操作方法同上。

4、化學(xué)滴定法測定樣品酯化度

稱取500mg多糖樣品于錐形瓶,溶于100mL無CO2水中,滴入5滴酚酞試劑,用0.1mol·L-1標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液滴定樣品,記錄起始滴定值V1;加入10ml 0.5mol·L-1 NaOH溶液,劇烈振蕩,放置15min,再加入10ML 0.5mol·L-1 HCL溶液,振蕩至粉紅色消失;加入3滴酚酞試劑,用0.1mol·L-1標(biāo)準(zhǔn)Na0H溶液滴定樣品,記錄皂化滴定值%,按公式計(jì)算DE。

傅立葉變換紅外光譜法測定當(dāng)歸果膠多糖的酯化度結(jié)論

應(yīng)用紅外光譜技術(shù)建立了一種對果膠多糖酯化度(DE)進(jìn)行快速定量分析的方法。DE與A1730(A1730+A1630)之間的線性回歸方程(r=0.9852)表明,果膠多糖的DE與其在l730和1630cm-1處的吸收峰面積之間有良好的線性關(guān)系。將FTIR法與傳統(tǒng)的化學(xué)滴定法進(jìn)行比較,兩種方法間相對誤差為7%,具備良好的重現(xiàn)性,與傳統(tǒng)方法相比具有樣品用量少、操作簡單、靈敏度高、重復(fù)性好、分析速度快等特點(diǎn)。

經(jīng)測定,從當(dāng)歸中提取的果膠多糖粗品和純品的酯化度介于42.36%~54.06%之間。FTIR測定果膠多糖酯化度具有可行性,可成為替代化學(xué)滴定法的一種的快速易行、準(zhǔn)確的方法。

天津能譜科技便十分注重開拓創(chuàng)新,不斷吸收國內(nèi)外先進(jìn)技術(shù),積極開發(fā)新產(chǎn)品、新型號,產(chǎn)品線不斷豐富。在積極研發(fā)新產(chǎn)品的同時(shí),能譜科技也十分注重服務(wù)體系的建設(shè),本著“質(zhì)量第一,信譽(yù)至上”的企業(yè)宗旨,能譜科技為大專院校、制藥、高分子材料、石油化工等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)提供完善服務(wù),受到廣大用戶的信賴和支持。未來,能譜科技還將繼續(xù)奉行“誠實(shí)、奉獻(xiàn)、開拓、進(jìn)取”精神,為實(shí)驗(yàn)室領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。


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